Protocolul nostru pentru dezlipirea și reținerea membranei Western blot include detalii pas cu pas privind îndepărtarea anticorpilor din membranele Western blot.
Stripping este termenul folosit pentru a descrie îndepărtarea anticorpilor primari și secundari dintr-o membrană Western blot. Decojirea este utilă atunci când se dorește investigarea mai multor proteine pe aceeași pată, de exemplu o proteină de interes și un control de încărcare. Când testați mai multe ținte, dezlipirea și retondarea unei singure membrane în loc să alergeți și să ștergeți mai multe geluri are avantajul de a economisi probe, materiale și timp.
Nu este recomandabil să se facă comparații cantitative ale țintelor sondate înainte și după dezizolare, deoarece procedura elimină o parte din proteine din membrană. Din același motiv, o membrană decupată nu ar trebui să fie sondată pentru a demonstra absența unei proteine.
Thermo Scientific Restore Western Blot Stripping Buffer îndepărtează în siguranță și eficient anticorpii primari și secundari din membranele de nitroceluloză și PVDF pentru a permite reprobarea Western blot chemiluminescente.
Caracteristici ale restaurării tamponului Western Blot Stripping Buffer:
• Economisește timp – nu este nevoie să re-rulați geluri și pete
• Economisește probă costisitoare – re-sondează membrana folosind același eșantion țintă
• Eficace – formularea este mai eficientă pentru eliminarea anticorpilor decât tampoanele de casă
• Gentle-nu deteriora antigenul țintă , în timpul desprinderii permițând resondare eficiente
• fara miros-mercaptani nici un mijloc nu înțepător mirosurile
• economice mai puțin costisitoare decât alte tampoane comerciale stripping
Detalii produs
Efectuarea electroforezei pe gel și teste de imunoblot duplicat pentru a testa noi anticorpi primari sau concentrații de anticorpi este consumatoare de timp și costisitoare. Restore Western Blot Stripping Buffer elimină aceste deșeuri atunci când detectează imunobloti cu substraturi chemiluminescente Western blot. Restore Stripping Buffer asigură îndepărtarea curată și eficientă a anticorpilor primari și secundari din imunobloturi fără îndepărtarea sau deteriorarea antigenului imobilizat permițând eliminarea și reprobarea bloturilor cu încredere.
Detectarea Western blot cu reactivi precum Thermo Scientific SuperSignal Substrates pentru hrean peroxidază este una dintre cele mai comune și sensibile metode utilizate în prezent. Deoarece aceste substraturi nu precipită și nu se leagă de suprafețele membranei, Western blots detectate prin chemiluminescență pot fi dezbrăcate cu reactivi care elimină anticorpii primari și secundari legați de afinitate. Pentru a fi eficient, un tampon de stripare trebuie să fie suficient de puternic pentru a disocia anticorpii legați, dar suficient de delicat pentru a lăsa proteinele țintă transferate intacte pe membrana nitrocelulozei sau PVDF. Restore Western Blot Stripping Buffer are aceste caracteristici.
Prin decupare și reprobare, nu este nevoie să risipiți probe rare sau costisitoare prin rularea mai multor geluri pentru a testa diferite ținte. O singură membrană dintr-un gel poate fi îndepărtată cu Restore Western Blot Stripping Buffer pentru a îndepărta anticorpii primari. Îndepărtarea petei durează doar 15 până la 30 de minute, în funcție de afinitatea anticorpului primar. După decapare, blocați și reprobati cu un nou anticorp primar. Alternativ, o pată poate fi decupată și reprobată cu concentrații de anticorpi ajustate pentru a optimiza condițiile după obținerea unor rezultate inițial slabe.
Aplicații
• Reutilizați o nitroceluloză sau
un transfer PVDF pentru a detecta o țintă diferită cu un anticorp primar diferit.
Rezumat protocol
• Spălați pata pentru a îndepărta substratul chemiluminescent.
• Incubați pata în tamponul Restore Western Blot Stripping timp de 5 până la 15 minute la 37 ° C (temperatura camerei este suficientă pentru unii anticorpi).
• Îndepărtați pata și spălați în tampon de spălare (TBS-T sau PBS-T).
• Testarea îndepărtării suficiente a anticorpilor.
• Efectuați următorul experiment imunoblot.
Stripping Buffer |
|||
| GR103020 | Genorise Scientific | 500 mL | EUR 89 |
WB Stripping Buffer |
|||
| AR0153 | BosterBio | 100mL (for 10 assays for an 5 × 8.5cm blot) | EUR 133.2 |
West Ez Stripping Buffer |
|||
| S2100-006 | GenDepot | 60ml | EUR 97.2 |
Microarray Stripping Buffer 1X |
|||
| 10250005-1 | Glycomatrix | 25 mL | EUR 21.5 |
Microarray Stripping Buffer 1X |
|||
| 10250005-2 | Glycomatrix | 100 mL | EUR 60.54 |
Nitrocellulose Stripping Buffer 10X |
|||
| 10750015-1 | Glycomatrix | 250 mL | EUR 34.22 |
Nitrocellulose Stripping Buffer 10X |
|||
| 10750015-2 | Glycomatrix | 500 mL | EUR 60.54 |
Blot Stripping Buffer 4X, pH 6.8 |
|||
| 20960004-1 | Glycomatrix | 250 mL | EUR 23.24 |
Blot Stripping Buffer 4X, pH 6.8 |
|||
| 20960004-2 | Glycomatrix | 500 mL | EUR 53.99 |
Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8 |
|||
| 20920002-1 | Glycomatrix | 500 mL | EUR 24.17 |
Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8 |
|||
| 20920002-2 | Glycomatrix | 1 L | EUR 36.14 |
Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8 |
|||
| 20920002-3 | Glycomatrix | 4 L | EUR 115.76 |
Blot Stripping Buffer II 4X, pH 2.5 |
|||
| 20960005-1 | Glycomatrix | 250 mL | EUR 25.45 |
Blot Stripping Buffer II 4X, pH 2.5 |
|||
| 20960005-2 | Glycomatrix | 500 mL | EUR 42.24 |
West Ez Stripping Buffer, Economic Size |
|||
| S2100-050 | GenDepot | 500ml | EUR 254.4 |