Pregătirea ADN genomic pentru genotipare

Reactivul de liză Viagen DirectPCR este un tampon utilizat pentru a liza țesutul animal și a elibera ADN-ul pentru aplicații viitoare, cum ar fi PCR. Promite să conțină inhibitori ai inhibitorilor PCR care se găsesc în țesuturile animale, făcând astfel ADN-ul eliberat compatibil pentru genotiparea ulterioară a PCR. Există câteva opțiuni diferite de compoziție tampon disponibile pentru cumpărare: coadă, ureche, sac de gălbenuș și celule cultivate. Cel mai bun lucru despre acest buffer este ușurința de utilizare și protocolul simplu. Pur și simplu adăugați în jur de 200-250 ul de reactiv și ~ 25 ul proteinază K (20 mg / ml) la proba de coadă. Tubul este incubat la 55 ° C timp de 4-6 ore, amestecarea intermitentă și vortexarea probei sunt utile pentru a asigura liza completă a cozii. Lizatele brute sunt apoi incubate la 85 ° C timp de 45 de minute pentru a inactiva proteinaza K. Pentru genotiparea PCR,

Am folosit acest tampon de mai multe ori. În cea mai mare parte, a funcționat foarte bine. Este mult mai ușor și mai rapid de utilizat decât kiturile DNeasy și mult mai ușor decât să-ți compui propriul tampon de liză de coadă PCR. Cu toate acestea, ADN-ul nu este cu siguranță la fel de pur și concentrat ca atunci când folosiți un kit sau vă creați propriul tampon cu precipitații și spălări ulterioare. Dacă este necesară o puritate mai mare, este posibil să se utilizeze lizatul ADN Viagen și să se adauge NaCI și izopropanol pentru a precipita ADN-ul, urmat de o spălare EtOH 70% ulterioară și reconstituire în 10 mM Tris-HCl.

Viagen Biotech